?然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测hlf对nsclc远处转移能力的影响，将载体/nci-h1975、hlf过表达nci-h1975、载体/nci-h460和hlfsh#1/nci-h460细胞接种到小鼠左心室。
?接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行h&e染色处理。如图所示。图3f-i和补充图4g，我们在与载体组相比，过hlf表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。
?相比之下，沉默hlf可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期(图3f-i和补充图4h)。
?因此，这些结果表明，低表达hlf的nsclc细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。
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?我们利用cck-8、集落形成和an连接素凋亡进一步研究了hlf在nsclc中的生物学功能，发现在正常培养条件下，hlf对nsclc细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响(补充图5a–c)。
?我们的结果显示，上调hlf会增加培养液的ph水平，而沉默hlf会降低培养基的ph水平，但正常情况下hlf并不影响nsclc细胞的表型和数量(补充图5d)。
?低表达hlf可能通过营养代谢途径促进nsclc细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。
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?然而，上调hlf抑制nsclc的生长，而沉默hlf可促进nsclc细胞的锚定和悬浮生长能力(图4a和b)，表明沉默hlf增强了nsclc细胞在悬浮条件下的生存能力，即anoikis耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。
?事实上，昼夜节律基因的失调导致了nsclc的代谢失调，hlf广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。
?在低血清(1%)和低葡萄糖(1g/l)培养液组成的低营养条件下，hlf过表达抑制了
nsclc细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然（图4c-e）。
?hlf参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是hlf抑制nsclc细胞生长的前提条件。
?在低营养条件下观察nsclc细胞hlf对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6a，hlf表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，hlf的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平(图4f–i)。
?矛盾的是，上调hlf增加了细胞内atp的总产生和ldh的活性(补充图6b和c）。这些发现表明，在低营养条件下，过表达hlf的癌细胞更容易发生有氧代谢而不是厌氧代谢，这进一步支持了上调hlf降低乳酸脱氢酶(ldh)的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因(。